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如何從酵母快速提取總RNA
 
摘要: 總RNA提取中,除了某些富含多糖多酚的植物組織以及土壤較為困難外,酵母由于其復雜的細胞壁結構也給實驗人員造成不小的麻煩。
眾所周知,總RNA提取的純度與完整性,對于許多分子生物學實驗的進展都至關重要,比如,Northern 印跡及雜交分析,cDNA文庫構建等,這些實驗的成敗在很大程度上取決于總RNA的提取質量。對于RNA含量豐富,易于破碎的樣品來說,高質量RNA的提取并非難事,但對于破壁較為困難的材料——酵母來說,就并非人人都能很好地提取出高質量的RNA。
酵母菌是一些單細胞真菌,目前已知的酵母菌有1000多種。酵母菌有三類:子囊菌、擔子菌和“假酵母”。目前已知大部分酵母都屬于子囊菌門,這是一種產生孢子的菌。酵母菌主要生長在潮濕或液態環境,有些也會生存在生物體內。目前,尤其是食品行業中,酵母菌顯得異常興盛,比如啤酒發酵,酸奶污染等都與酵母息息相關。所以,科研人員對酵母菌的研究工作也是越來越熱。但是,在進行更深層次研究時,卻都會碰到一個棘手的問題——高質量酵母總RNA的獲取。下面分別是酵母菌群和形態圖。
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酵母菌群圖
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酵母菌形態圖
學過微生物學的都知道,酵母是一種具有特殊細胞壁結構的真菌,其細胞壁是由內層葡聚糖的細纖維,覆蓋在細纖維上面的中間層糖蛋白和外層甘露聚糖,由1,6一磷酸二酯鍵共價連接,形成復雜的,緊密交聯的網狀結構。與細菌細胞壁一樣,酵母細胞壁比其它種類的細胞壁都相對會厚,并且交聯又緊密,所以這就給RNA的提取純化工作帶來很大困難。
目前,市場中酵母RNA提取的產品均很難對酵母細胞壁進行有效地破碎, TRIZOL主要成份是異硫氰酸胍和苯酚,沒有有效破壁的成分,提取的酵母總RNA利用電泳分析只具有5s rRNA,很顯然不完整;玻璃珠型的不是破碎不充分,得率低,就是破碎太劇烈片段斷裂,很難掌控;而利用傳統的苯酚法提取,要經過組織勻漿,苯酚處理而后乙醇沉淀等一些列步驟,雖然最后能得到生物活性的RNA。但步驟復雜,耗時較長且不利于多個樣品同時操作,也并非理想的提取方法。后來有些公司雖然對以上方法又作出了改進,但提取效果仍不是很理想。
百泰克公司憑借多年來RNA提取方面積累的豐富經驗,開發出酵母總RNA快速提取試劑盒,采用新型高效的破壁酶,這是一種含有纖維素酶、果膠酶、甘露糖酶、蔗糖酶和蛋白酶等幾十種具有生物活性的混合酶。酵母細胞按照產品操作處理后,破壁率可達90%以上,其破碎效果見下圖。
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A 未經破壁酶處理的酵母細胞
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B 經破壁酶處理后的酵母細胞

因此,采用此種方法處理既可以徹底避免過去超聲破碎所需時間久,效果不理想以及機械破碎不穩定的弊端,同時還規范了RNA提取中的破碎標準,便于多個樣品之間進行比對。以下為百泰克酵母總RNA快速提取試劑盒特點:
1 高品質的進口吸附膜 極大程度上減小了其它進口或國產吸附膜所造成的柱與柱之間吸附能力的差異,保證實驗的重復性
2 獨特的結合抽提液 性能穩定、純度高,可極大程度提高結合效率,從而為RNA的得率打下良好的基礎
3 離心柱型 簡便快捷,不需要再采用傳統乙醇沉淀,簡化操作步驟,提高實驗效率。同時也可避免提取物過渡干燥不易溶解的問題
4 新型高效破壁酶 可以將酵母細胞壁有效破除,不會造成機械破壁中的RNA損傷,從而為有效地結合抽提打下良好的基礎。
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